Cellulær cAMP respons - "nye" receptorer (EPAC) og nye roller for "gamle" receptorer (cAMP-kinase I, II).

Prosjektet skal ta for seg: 1. Komparativ kartlegging (mapping) av cAMP bindingssetene v.h.a. cAMP analoger i "vill-type" EPAC-1 og RIa og RIa mutagenisert for å oppnå punktvis aminosyrelikhet med EPAC. 2. Finne hvorfor forskjellige cAMP analoger induserer forskjellig konformasjon av R - ved analyse av hvilke kjemiske egenskaper hos analoger som gir sterkest konformasjonsendring og ved kinetisk/strukturell analyse av hvor i R molekylet de funksjonelt viktige konformasjonsendringene skjer. 3. Intensivere samarbeidet med dr. Genieser/professor Jastorff i Bremen for å videreutvikle EPAC-spesifikke og cAKI-spesifikke cAMP analoger (aktivatoriske og inhibitoriske) med ytterligere forbedrete egenskaper og gjennomføre intaktdyrforsøk for å teste to ksisitet (forhåpentlig lav) av slike analoger. 4. Bruke reroviral transduksjon for cellulær overekspresjon av RIa, RIb og RIIa subenheter av cAK. Sammenligne deres effekt på genekspresjon (matrise) og global protein fosforyleringsmønster (proteomikk) innbyrdes og med cAMP analoger. Framfor alt vise i intakte celler at R subenheter kan hemme kinase i nærvær av maksimal cAMP stimulering, og at dette fenomenet er svakere for RIb. 5. Bruke subcellulært ankret R (med og uten AKAP's) til å visualisere holoenzymdannelse med mikroinjisert fluoresensmerket C i nærvær av cAMP. 6. Finne betydningen av kotranslasjonell cAMP-indusert fosforylering av aktin og identifisere 4 andre kotranslasjonelt fosforylerte proteiner.